yfp.elisacorteggiani.comLaboratorio di Biochimica del Metabolismo

Laboratorio del corso di Biochimica del Metabolismo Corso di Laurea in Biotecnologie Produzione di una Proteina Ricombinante Introduzione In questa esercitazione purificheremo una proteina ricombinante ed analizzeremo la qualità della nostra preparazione e la funzionalità della proteina ottenuta. La proteina è stata precedentemente clonata in un vettore per l'espressione in un un ceppo E.coli ingegnerizzato per ospitarlo. Dopo la trasformazione e la crescita dei batteri in condizioni selettive, abbiamo indotto la sintesi della proteina. Trattandosi di una molecola fluorescente, la sua espressione è facilmente evidenziabile. Voi estrarrete, per lisi dei batteri, una frazione di proteine solubili dalla quale purificherete ulteriormente la vostra proteina di interesse utilizzando una cromatografia per affinità. Valuteremo insieme la qualità della purificazione analizzando in gel elettroforesi il contenuto proteico di ciascuna delle frazioni ottenute. Valuteremo inoltre anche la funzionalità della proteina purificata tramite analisi spettrofotometrica e fluorimetrica del preparato. Informazioni utili Il sistema di espressione La proteina SYFP Estrazione e Purificazione SDS-PAGE Spettrofotometria Fluorimetria Protocolli sperimentali Calendario I risultati sperimentali torna alla pagina principale Questa esercitazione è largamente basata sull'esperienza del "laboratorio di Biologia Molecolare " del corso di Laurea in Medicina e Chirurgia messa appunto dal Prof. Roberto Bisson e colleghi ed è stata specificatamente riadattata per gli studenti del II anno del corso di Laurea Triennale in Biotecnologie. Ci sono dei ringraziamenti che sento assolutamente di dovere fare ad alcune persone cha hanno contribuito in modo determinante alla realizzazione di questo laboratorio. Sono disponibilissima a rispondere a domande e richieste di chiarimenti, scrivete pure una mail a: Elisa Corteggiani Carpinelli: elisa.corteggiani@gmail.com...